為什么要進(jìn)行微生物限度檢測方法的驗證?是為了確認所采用方法適合藥品細菌、霉菌、酵母菌數測定。照驗證過(guò)的檢查法和檢驗條件進(jìn)行供試品細菌、霉菌、酵母菌數檢查能保證檢驗結果的準確、可靠。

　　驗證過(guò)程中你將會(huì )遇到的難點(diǎn)問(wèn)題

　　1、藥品中污染的微生物處于不穩定狀態(tài)，微生物種類(lèi)具有不確定性;

　　2、在藥品生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節中, 微生物污染存在著(zhù)不均勻性;

　　3、無(wú)論是無(wú)抑菌性藥物還是抑菌性藥物都要進(jìn)行微生物限度檢查，特別是污染于抑菌藥物中的微生物在一定條件下可以穩定存在一段時(shí)間，雖然它們可能受到損傷，但未死亡，如服用至人體內, 當條件適宜時(shí)仍可生長(cháng)繁殖。

　　4、某些藥物在試驗條件下呈現抑菌作用并干擾待檢菌的檢出或計數, 但當服用后受到胃液及腸液的稀釋, 抑菌作用減弱或直接靜脈注射入血液, 細菌便可復蘇并繁殖, 對人體造成危害。

　　5、任何一種抑菌藥物均有一定的抑菌范圍，即抗菌譜。相當多的抗細菌藥物對真菌毫無(wú)作用。對所有菌類(lèi)均敏感的藥物幾乎不存在。

　　6、細菌對抑菌藥物有適應性，耐藥性致病菌株在臨床上屢見(jiàn)不鮮，所以抑菌藥物內是可能存在微生物并可對人體健康造成危害的，因此對抑菌性藥物也有必要進(jìn)行微生物限度檢查，但抑菌性藥物在檢查過(guò)程中會(huì )有明顯的抑菌作用，這在很大程度上影響了微生物的檢出。

　　具備這些驗證條件，如何進(jìn)行驗證：

　　1、驗證實(shí)驗的設施、設備、器具和材料

　　2、驗證試驗用的稀釋劑( 液) 、沖洗液

　　3、具抑菌性樣品處理方法

　　培養基稀釋法：該法一般適合于抑菌作用不是很強的供試品。

　　化學(xué)試劑中和法

　　薄膜過(guò)濾法該法：常見(jiàn)的檢查方法，適合于可濾過(guò)的供試品，特別是無(wú)菌檢查。

　　離心沉淀法：常用于抑菌活性較強而又無(wú)法直接過(guò)濾的供試品，特別是不溶于水的固體中藥制劑。

　　驗證步驟：

　　1、根據樣品特性，制定檢驗方法和檢驗條件;

　　2、保證驗證試驗所用的儀器、培養基和試劑等均符合試驗要求;

　　3、按制定的方法進(jìn)行試驗;

　　4、根據驗證結果，判斷是否符合驗證的標準。若符合，按驗證的方法和條件進(jìn)行藥品的微生物限度檢查;若不符合，應重新設立驗證方案，再進(jìn)行驗證，直至驗證結果符合設立的驗證標準。

　　Tips：驗證時(shí)，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數所規定的方法及要求進(jìn)行。對各試驗菌的回收率應逐一進(jìn)行驗證。驗證試驗至少應進(jìn)行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。